Microscopio Nikon Timelapse

El microscopio confocal de escaneo láser Nikon C2 es un microscopio ideal para realizar timelaspse de larga duración, pues gracias a la cámara de incubación que tiene es posible mantener las muestras en condiciones óptimas por más de 8 horas. Este equipo cuenta con el sistema Perfect Focus System (PFS) de Nikon, el cual corrige los cambios de focos generados tanto por el drift térmico como el drift mecánico, permitiendo mantener en foco las muestras durante toda la adquisición. Además de adquirir imágenes confocales, en este equipo se puede realizar microscopía widefield, pues incorpora una cámara CMOS que hace posible adquirir imágenes de epifluorescencia convencional y/o imágenes de campo claro. Finalmente, la platina motorizada que tiene este equipo facilita la adquisición de imágenes de muestras de mayor tamaño que el campo de visión, permitiendo obtener información de un campo de visión grande con alta resolución espacial.

Microscopio	Nikon Ti2-E invertido
Objetivos	Plan Apo 10x DIC NA 0.45
	Plan Apo 20x DIC NA 0.75
	Plan Apo 60x OIL DIC NA 1.40
	Plan Apo 100x OIL NA 1.45
Detección	Cámara CMOS ORCA-Flash 4.0 V3 Hamamatsu C13440, tamaño del pixel 6.5 um x 6.5 um
	PMT C2-DU3 3
Software	NIS-Elements
Otros	Platina motorizada modelo Ti2-E de Nikon que incluye además el sistema de mantención del foco PFS (Perfect Focus Systems)
	Cámara de incubación con control de temperatura, humedad y CO2
Fuente de luz	Láser estado sólido 405 nm
	Láser estado sólido 488 nm
	Láser estado sólido 561 nm
	Láser estado sólido 640 nm
Filtros epifluorescencia	DAPI (Ex 350/50 y Em 460/50 nm)
	GFP (Ex 470/40 y Em 525/50 nm)
	Texas Red (Ex 560/40 y Em 630/70 nm)
	Cy5 (Ex 620/50 nm y Em 690/50 nm)
Espejos dicroicos y Filtros de detección confocal	Channel 1: C2 V4C EM 445/35 + 660LP (detecta entre 410-480 + LP 660 nm)
	Channel 2: C2 525/50 [560] 600/50 P2 (488/561) (detecta > 480 y 560 nm)
	Channel 3: detecta < 560 y 650 nm

Widefield: epifluorescencia convencional y campo claro.
Epifluorescencia Confocal.
Técnica FRAP (Fluorescence recovery after photobleaching).
Análisis de colocalización.
Inmunofluorescencia y detección de sondas.
Series en Z (z-stack) y reconstrucción 3D.
Time-lapse (series temporales) en célula viva.
Adquisición de imágenes de mayor tamaño que el campo de visión (Large Image).

Técnica: la imagen corresponde a la unión (stitching) de varias imágenes adquiridas en microscopía confocal, esta aplicación del microscopio recibe el nombre de Large Image. Muestra: cerebro de ratón con una inyección control (agua) en la corteza motora (cirugía estereotáxica). Lo que está marcado en azul corresponde a hoechst, en rojo los astrocitos con marcador GFAP, y en verde microglías con marcador Iba-1.

Autor: Maria Luisa Leon, Laboratorio de Neurobiologia Celular y Regeneración, Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas.

Microscopio Timelapse

Técnica: Microscopía de Expansión y confocal. Muestra: Corte coronal de cerebro de ratón. En las imágenes se observa el giro dentado, estructura que forma parte del hipocampo, en cortes coronales de cerebro de ratón. Se marcaron los núcleos con Hoechst 33342 (marca azul), la proteína tirosina kinasa no receptora Abl1, y βIV spectrin, proteína que forma parte del citoesqueleto periódico del segmento inicial del axón. Se observan muestras preparadas con un protocolo de IF con extracción de antígeno, y también con un protocolo de microscopía de expansión. La microscopía de expansión permite observar con mayor claridad la marca del segmento inicial del axón, e incluso observar el arreglo periódico de βIV spectrin. Ambas imágenes fueron adquiridas con un lente objetivo 20x.

Autor: Cerebros obtenidos y cortados por Tamara Marín PhD. Expansión, inmunofluorescencia, adquisición y procesamiento de imágenes por Nicolás Stuardo. Laboratorio de Señalización Celular (Dra. Alejandra Álvarez)