Microscopio Confocal con detector espectral Nikon  y cuatro láseres de estado sólido a 405nm, 488nm, 561nm y 640nm con modulación de intensidad por medio de sistema AOTF. El sistema posee tres canales de fluorescencia con una velocidad de escaneo  de 1 fps a 512×512 pixeles. El detector espectral posee 32 canales para trabajo a resoluciones de 2,5nm, 5nm y 10nm, y una velocidad de escaneo de 0,5 fps a 512×512 pixeles permitiendo separar aquellas marcas de fluoroforos muy cercanos.

El Microscopio confocal C2 está montado sobre una plataforma invertida motorizada modelo Eclipse Ti-E de Nikon con objetivos de 10x,20x,40x oil y 60x oil  que incluye además el  sistema de mantención del foco PFS (Perfect Focus Systems) para experimentos de time lapse .

Todas las funciones del equipo en su opción confocal normal y espectral son controladas por el Software NIS-Elements C de Nikon que es de fácil manejo y con una plataforma intuitiva, incluyendo herramientas de análisis y procesamiento de imágenes.

Microscopio Nikon modelo Eclipse C2 (invertido)
Objetivos Plan Fluor 10x DIC L NA 0.3
Plan Apo VC 20x DIC N2 NA 0.75
Plan Apo 40x OIL DIC H NA 1.0
Plan Apo VC 60x OIL DIC N2 NA 1.4
Detección PMT
Software NIS-Elements C de Nikon
Otros Platina motorizada modelo Eclipse Ti-E de Nikon que incluye además el sistema de mantención del foco PFS (Perfect Focus Systems)
Platina de incubacion con control de temperatura y CO2
Fuente de luz Láser 638nm
Láser 561nm
Láser 488nm
Láser 405nm
Filtros Cubo Em 445/35 (427 – 462nm) y 660nm Long Pass. Este cubo es para ser usado con los laser 405nm y 641nm (o 638).
Cubo con Em 525/50 (500 – 550nm) y 600/50 (575 – 625nm). Este cubo es para ser usado con los laser 488nm y 561nm.
Detector espectral Posee 32 canales para trabajo a resoluciones de 2,5nm, 5nm y 10nm, y una velocidad de escaneo de 0,5 fps a 512x512 pixeles permitiendo separar aquellas marcas de fluoroforos muy cercanos
  • Análisis de colocalización.

  • Inmunofluorescencia y detección de sondas.

  • Series en Z (z-stack) y reconstrucción 3D.

  • Time-lapse (series temporales) en celula viva.

  • Tecnica FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching).

  • Tecnica FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer).

  • Determinación de espectros de fluorescencia.

  • Estudios de GFP sensible a ROS.

  • Visualización de GFP cuando esta marcando estructuras celulares que contengan clorofila.

Microscopio confocal espectral Nikon

Microfluidic culture of rat cortical neurons. At 6 DIV neurons were stimulated with BDNF for 48 hours along with subunit B of Cholera toxin conjugated to alexa 555 (Ctb555; red) and then were immunostained with rabbit anti-MAP2 antibody (green). Magnification 60x.

Autor: Guillermo Moya
Microscopio confocal espectral Nikon

Tcf4-positive fibroblasts located in the epimysium of diaphragm Transverse section through mouse diaphragm muscle shows muscle connective tissue fibroblasts that highly express the transcription factor Tcf4 (green). Individual myofibers are delineated by the basal lamina (red). Peripheral nuclei of individual myofibers and other muscle resident cells are stained blue. Magnificacion 400X.

Autor: Osvaldo Contreras. Departamento de Biología Celular, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.
Microscopio confocal espectral Nikon

Triple immunofluorescence staining has been performed in intact (the five upper fibres) and degenerated peripheral nerve fibres (the five lower fibres). The axonal specific marker neurofilament is shown in red, the myelin sheath marker MBP in blue and the Schwann cell cytoplasm in green. Myelin sheath disorganization and axonal fragmentation is seen in 3 days degenerated nerve fibers.

Autor: Sebastian Barrientos and Dr. Felipe Court. Department of Physiollogy, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile
Astrocitos

Equipo: Microscopio Confocal Espectral Nikon. Técnica: Confocal. Muestra: Cultivo primario de astrocitos de ratón en inmunofluorescencia indirecta. En la imagen se muestran astrocitos GFAP positivos en rojo (GFAP-555), la presencia de hemicanales de conexina 43, en verde (Cx43 conjugado con Alexa 488) y marca nuclear en azul (Hoechst 33342). Barra de escala = 20um. Magnificación 60x.

Autor: Fernanda Gárate, UMA-BIO.