El Microscopio invertido Olympus se encuentra equipado para técnicas de fluorescencia con iluminación LED en amarillo y cyan. El sistema permite la observación de muestras vivas o fijadas y se encuentra optimizado para realizar mediciones de FRET (Forster Resonance Energy Transfer), con una rueda de filtros de alta velocidad para adquisición de multiples canales. El sistema es utiliza el software Metafluor para adquisición, especializado en mediciones de iones y funciones intracelulares ratiometricas en una o múltiples longitudes de onda. Este software permite análisis y procesamiento de los datos en real-time y también off-line luego de haber realizado el experimento.

Microscopio Olympus modelo IX71 (invertido)
Objetivos 10x NA 0.30 UPlan FL N
40x NA 0.95 UPlanSApo con collar de corrección
Detección Cámara CCD (Sony) monocromatica enfriada modelo CoolSNAP HQ2, 1392H x 1040V de 1.4 mega pixeles y frame rate de 10 fps (maximo de 104 fps con un binning de 8x8 y ROI). Binning de 2x2, 4x4 y 8x8. Esta cámara esta diseñada para aplicaciones cuantitativas en microscopía de fluorescencia.
Software Metamorph NX (Molecular Probes)
MetaFluor (Molecular Probes)
Fuente de luz Iluminacion LED (CoolLED pE)
Filtros Amarillo: Fuente de luz LED 500nm, mas Chroma filter 89002. Excitación: 500/20, Emisión: 535/30
Cyan: Fuente de luz LED 440nm, mas Chroma filter 89002. Excitación: 430/24, Emisión: 470/24
  • Adquisición de imágenes de células vivas en placas de Petri y placas multi-well

  • Adquisición de imágenes de células vivas sin tinción con contraste de fases en 10x.

  • Adquisición imágenes de células vivas y fijadas en fluorescencia para amarillo (500nm) y cyan(440nm).

  • Combinación de filtros hace posible realizar ensayo FRET.

  • Análisis de imágenes y obtención de datos ratiométricos para FRET con software Metamorph Advanced y Metafluor.

Microscopio FRET Olympus IX71

Células HeLa con coexpresion de YC3 (citoplasma) y YC3.n1 (nuclear). Los cambios en señal FRET se observan al estimular el sistema con histamina, con imágenes adquiridas cada 50ms.