El Microscopio invertido Olympus se encuentra equipado para técnicas de fluorescencia con iluminación LED para 4 colores (azul, verde, amarillo y rojo). El sistema permite la observación de muestras vivas o fijadas y se encuentra optimizado para realizar mediciones de FRET (Forster Resonance Energy Transfer), con iluminación LED en amarillo y cyan y una rueda de filtros de alta velocidad para adquisición de multiples canales. El sistema es utiliza el software Metamorph Advanced y Metafluor para adquisición, especializados en mediciones de iones y funciones intracelulares ratiometricas en una o múltiples longitudes de onda. Este software permite análisis y procesamiento de los datos en real-time y también off-line luego de haber realizado el experimento.

Microscopio Olympus modelo IX71 (invertido)
Objetivos 10x NA 0.30 UPlan FL N
40x NA 0.95 UPlanSApo con collar de corrección
Detección Cámara CCD (Sony) monocromatica enfriada modelo CoolSNAP HQ2, 1392H x 1040V de 1.4 mega pixeles y frame rate de 10 fps (maximo de 104 fps con un binning de 8x8 y ROI). Binning de 2x2, 4x4 y 8x8. Esta cámara esta diseñada para aplicaciones cuantitativas en microscopía de fluorescencia.
Software Metamorph NX (Molecular Probes)
MetaFluor (Molecular Probes)
Fuente de luz Iluminacion LED (CoolLED pE)
Filtros Azul: Fuente de luz LED 365nm, más Chroma filter 39000. Excitación: 375/28, Emisión: 460/50
Rojo: Fuente de luz LED GYR (488-720), más Chroma Filter 39010. Excitación: 560/40, Emisión: 635/60
Verde: Fuente de luz LED GYR (488-720), más Chroma filter 39002. Excitación: 480/30, Emisión: 535/40
Amarillo: Fuente de luz LED 500nm, más Chroma filter 89002. Excitación: 500/20, Emisión: 535/30
Cyan: Fuente de luz LED 440nm o GYR (488-720), más Chroma filter 89002. Excitación: 430/24, Emisión: 470/24

  • Adquisición de imágenes de células vivas en placas de Petri y placas multi-well

  • Adquisición de imágenes de células vivas sin tinción con contraste de fases en 10x.

  • Adquisición imágenes de células vivas y fijadas en fluorescencia para amarillo (500nm) y cyan(440nm).

  • Combinación de filtros hace posible realizar ensayo FRET.

  • Análisis de imágenes y obtención de datos ratiométricos para FRET con software Metamorph Advanced y Metafluor.

Microscopio FRET Olympus IX71

Células HeLa con coexpresion de YC3 (citoplasma) y YC3.n1 (nuclear). Los cambios en señal FRET se observan al estimular el sistema con histamina, con imágenes adquiridas cada 50ms.